十全十美难,十全九美却可以通过选择一款好的转染试剂来实现。理想的转染试剂包括要具有较高的转染效率,细胞毒性低,操作简单可重复,价格还要可爱。现在大多数实验室用的是脂质体系列转染试剂,但脂质体对细胞毒性大,某些细胞的转染效率还很低,看单孔的价格也很不美好。尤其是在转染RNA方面,脂质体的劣势较明显。QIAGEN在转染试剂领域的研发思路与其核酸纯化领域的精而专,全而深不同。在转染试剂的研发过程中,另辟蹊径,研精致思进而做到小而美的转染产品。从市面上众多转染试剂的一片红海中,神奇的开辟出一块蓝海,为客户烹制出了几款高效、快速、低毒又亲民的转染试剂私房菜。每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。细胞转染试剂价格
对 HepG2 细胞转染效率的比较
右图:使用以上转染试剂将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产商的提供的转染步骤转染到 HepG2 细胞(在胶原预处理的培养皿中培养)。在转染 48 小时之后,用流式细胞仪检测 GFP 阳性细胞(%)和荧光强度。
左图:血清和***存在的条件下能提高 LipoD293 试剂(升级版)对在 HepG2 细胞的转染效率。通过三种不同的条件下转染 HepG2 细胞(生长在胶原处理的培养皿上)---无血清和***,10% 血清和***的存在,转染 5 小时后换液和不换液。
上海蛋白转染试剂推荐CycloFect转染试剂,你了解多少?
胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要!!当然也要保证细胞状态特别好,没有细微污染,铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦!载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统,当然使用三质粒系统的小伙伴居多,一定要选择成熟商业化的载体系统!载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失,或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯:建议目的基因载体和阴性对照GFP载体是同一批,且建议每次包装都如此操作,要保证目的基因的表达载体构建纯化良好,质粒间比例得当,并且对质粒进行酶切验证。
转染 48 小时后,使用尼康荧光显微镜 GFP 荧光进行成像(左侧四幅图),A:LipoD293; B:293fectin;C:Xfect 和 D:Fugene 6. 带有 6xHis 标记的 GFP 荧光蛋白使用 Ni-NTA 亲和柱技术实现分离。5 微升洗脱液载入 SDS-PAGE 凝胶电泳分离并进行 Coomassie 亮蓝染色(右上图 E),道 1 为 LipoD293293、道 2 为标准蛋白分子、道 3 为 Xfect、道 4 为 293fectin 和道 5 为 Fugene 6。这四种转染试剂产生蛋白质的效率被进一步定量(见右下图 F)。产生慢***的比较
通过 LipoD293™ 试剂(升级版)和 Lipofectamine LTX(LTX)试剂将三个 cDNAs 共转染进 293T 细胞。一个 GFP 载体,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用来测定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 细胞,其次是分别添加不同量的慢定都上清液,1 微升(上图)和 10 微升(下图)。 原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖.
产生慢***的比较
通过 LipoD293™ 试剂(升级版)和 Lipofectamine LTX(LTX)试剂将三个 cDNAs 共转染进 293T 细胞。一个 GFP 载体,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用来测定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 细胞,其次是分别添加不同量的慢定都上清液,1 微升(上图)和 10 微升(下图)。
5 天后,细胞通过流式细胞仪检测。右上角的数字表明转导的细胞的百分比来测定慢***的滴度。由 LipoD293™ and LTX 产生的慢***的滴度被量化,分为是 8x10^6 和 3x10^6 tu/ml 。 包括**常见的DNA,用于基因编辑的siRNA,能够更快表达蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是体内转染。上海罗氏转染试剂价格
细胞转染必备——高效低毒转染试剂.细胞转染试剂价格
对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的cDNA(phRL-CMV)和绿色荧光蛋白GFP的cDNA按照生产商的提供的转染步骤分别转染到CHO细胞。在转染24小时后,荧光素酶的活性使用Beckman公司的化学发光监测器测定;GFP阳性细胞率使用BD公司的FACS检测。左图:LipoD293试剂(升级版)和Lipofecatmine2000(L2K),TransIT以及Fugene6的价格比较(美元/1000微升)。所有的价格是从生产制造商的网站上收集对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧细胞转染试剂价格
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